Characterization and study of amino acid transporter regulation in a key species of French aquaculture : rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
Caractérisation et étude de la régulation des transporteurs d'acides aminés chez une espèce phare de l'aquaculture française : la truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss)
Résumé
Amino Acids (AA) are essential nutrients for cell function, participating in protein synthesis and many metabolic pathways. They are also important signalling molecules, which, depending on their availability, contribute to the control of cellular homeostasis. To enter into the cell and perform these functions, AA are dependent on Amino Acid Transporters (AAT), the main determinants of AA influx for their cellular availability. AAT, numbering 75 in mammals, are transmembrane proteins belonging to the SLC family, comprising over 400 different members. Nevertheless, this family is one of the least characterized protein families, notably due to its apparent complexity: multiple transport properties, substrates, cellular and tissular localizations, etc. However, medical research demonstrates that dysregulation and loss of AAT functions are associated with numerous pathologies, illustrating their fundamental role in maintaining cellular homeostasis. While the study of AAT functions in mammals in the medical field seems well established, AAT complexity tends to lead to weaker characterizations in other study models and other research areas, notably in the context of farm animal nutrition.This thesis is part of an aquaculture context, where the industry is now demanding new insights into the feeding of farmed species to formulate sustainable diets. The Rainbow Trout (RT), main fish species produced in France, is also concerned. In order to better understand the mechanisms governing AA homeostasis, key nutrients in RT metabolism, the aim of this thesis was to characterize all AAT in this species: from their in silico identification in RT genome to the study of their transcriptional regulation by nutritional conditions. By using an in vitro model, RT cell lines, we demonstrated that AAT expression was highly dependent on nutrient availability, their dysregulations directly impacting the intracellular AA pool and associated signalling pathways such as mTORC1, the major regulator of cellular anabolism and activated by the presence of AA. Integrating AAT regulations by multiple nutritional conditions led to the identification of three major regulatory groups, one of which being highly dependent on AA availability through GCN2-dependent regulations, a signalling pathway responding to AA deficiency and orchestrating a cellular response to cope with the resulting stress by overexpressing several AAT. Evidences of such regulatory groups was also brought in vivo.By combining AAT regulations and their effects on the intracellular AA pools with mathematical modelling, we have also proposed a general model of AA flux through three major groups of AAT with potentially distinct transport activities. This study has enabled us to propose a new method for AAT analysis, that is global and physiological, and relatively easy to implement and transposable to numerous species for various scientific contexts. Finally, this study also demonstrates the specific regulation of cellular homeostasis by AA in RT, pointing to potential unconventional AA for activation of these signalling pathways. This raises questions about the ideal supply of functionally essential AA for RT physiology and growth.
Les Acides Aminés (AA) sont des nutriments essentiels au fonctionnement cellulaire par leur participation à la synthèse des protéines et à leur implication dans de nombreuses voies métaboliques. Les AA constituent également des molécules signales qui, selon leur disponibilité, participeront au contrôle de l'homéostasie cellulaire. Pour entrer dans la cellule et accomplir leurs fonctions, les AA sont dépendant de Transporteurs d'Acides Aminés (TAA), déterminants principaux de l'influx d'AA pour leur disponibilité cellulaire. Les TAA, au nombres de 75 chez les mammifères, sont des protéines transmembranaires appartenant à la famille des SLC, composée de plus de 400 membres différents. Cette famille constitue néanmoins l'une des familles de protéine les moins caractérisées, notamment en raison de son apparente complexité : diversité des propriétés de transport, variabilité des substrats, et multiples localisations cellulaires et tissulaires, entre autres. Cependant, la recherche médicale démontre que les dérégulations et pertes de fonctions des TAA sont associées à de nombreuses pathologies, illustrant leurs rôles fondamentaux pour le maintien de l'homéostasie cellulaire. Bien que, chez les mammifères, l'étude des fonctions des TAA dans le domaine médical soit bien établi, la complexité entourant les TAA tend à entrainer de plus faibles caractérisations chez d'autres modèles d'études et d'autres problématiques, notamment dans le cadre de la nutrition des animaux d'élevage.Cette thèse s'inscrit dans un contexte aquacole, où la filière demande aujourd'hui de nouveaux niveaux de compréhension de l'alimentation des espèces élevées pour la formulation de régimes alimentaires durables. La Truite Arc-en-Ciel (TAC), première espèce de poisson produite en France est, elle aussi, concernée. De manière à mieux comprendre chez cette espèce les mécanismes qui régissent l'homéostasie des AA, nutriments essentiels à son métabolisme, l'objectif de cette thèse était de caractériser tous les TAA chez la TAC : de leur identification in silico à l'étude de leurs régulations transcriptionnelles par les conditions nutritives. En s'appuyant sur un modèle in vitro, les lignées cellulaires, nous avons démontré que l'expression des TAA était fortement dépendante de la disponibilité en nutriments ; leurs dérégulations impactant directement le pool intracellulaire d'AA et les voies signalétiques associées comme mTORC1, régulateur majeur de l'anabolisme cellulaire et activé par la présence d'AA. L'intégration des régulations des TAA par de multiples conditions nutritives a permis l'identification de trois grand groupes de régulation, dont un fortement dépendant de la présence d'AA par des régulations dépendantes de GCN2, voie signalétique répondant à la carence en AA et orchestrant une réponse cellulaire pour faire face au stress engendré en surexprimant notamment plusieurs TAA. L'existence de tels groupes de régulation a également été validée in vivo.En associant la régulation des TAA et leurs effets sur le pool intracellulaire d'AA à de la modélisation mathématique, nous avons également proposé un modèle général des flux d'AA à travers trois grands groupes de TAA aux activités de transport potentiellement distinctes. Cette étude a permis de proposer une nouvelle méthode d'analyse des TAA, globale et physiologique, relativement aisée à mettre en œuvre et transposable à de nombreuses espèces pour divers contextes scientifiques. Enfin, cette étude démontre également des spécificités de régulation de l'homéostasie cellulaire par les AA chez la TAC, pointant sur de potentiels AA non conventionnels à l'activation de ces voies signalétiques, ce qui questionne sur l'apport en AA fonctionnellement essentiels idéal à la physiologie de la TAC et à sa croissance.
Origine | Version validée par le jury (STAR) |
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